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　    斑蝥是我國中藥中很早被發(fā)現(xiàn)有抗癌作用的藥物，其活性成分為斑蝥素，它對多種癌細胞有較強的抑制和破壞作用。有人用低濃度氫氧化鈉溶液煎煮處理提取斑蝥素獲得成功，亦可用超聲波提取斑蝥素。本實驗確定了超聲波提取斑蝥素的好的工藝，現(xiàn)報道如下。

　　1 材料

　　JP600G型超聲波提取罐(武漢嘉鵬電子有限公司);島津GC-14B,C-R7A氣相色譜儀(日本島津公司)。斑蝥(經(jīng)廣州中藥大學鑒定為南方大斑蝥);斑蝥素(廣東省藥檢所);氫氧化鈉、丙酮為分析純;其余均為色譜純。

　　2 方法

　　2.1 含量測定

　　2.1.1 色譜條件 CBP-1(25cm×0.25mm, 5μm)色譜柱，氫火焰離子化檢測器，氮氣(20 mL· min-1，130 KPa)，氫氣(65 KPa)，AIR(65 KPa)，柱溫：170℃，進樣口溫度：210℃，檢測器溫度：250℃。

　　2.1.2 對照品溶液配制 精密稱取斑蝥素對照品 6mg于5mL量瓶中加丙酮至刻度，得濃度為1.2g· L-1的對照品溶液。

　　2.1.3 供試品溶液制備 精密吸取斑蝥素提取液 10mL,鹽酸調(diào)至PH2，氯仿萃取3次(20，15，15mL) 合并氯仿液，水浴蒸干，殘渣丙酮溶解，轉(zhuǎn)移至1mL量瓶，加丙酮至刻度，即得。

　　2.1.4 含量測定 取對照品溶液0.8μL,供試液 2μL,進行氣相色譜分析，外標法計算含量(斑蝥素保留時間約5.85min)。

　　2.2　超聲波提取工藝　以斑蝥素含量為指標，采用正交設計法，選擇L4(32)正交試驗表，考察氫氧化鈉濃度、超聲波功率、超聲時間對斑蝥素含量的影響，優(yōu)選好的提取工藝。因素與水平見表1，正交設計見表2。提取操作為：稱取斑蝥2g,加入10倍量125mmol· L-1氫氧化鈉溶液，按正交試驗表中條件提取，提取液濾過，合并濾液，以3000r·min-1離心10min,上清液水浴濃縮至 20mL。照含量測定方法測定含量，以含量高者為滿分10分，余按下式計算：本次試驗得分=本次試驗含量÷最高含量×10。表1　試驗因素水平表 Tab 1 Level of experimental factors

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　　因素

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　　水平 氫氧化鈉濃度/mmol·-1 超聲功率 超聲時間/min-1

　　A B C

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　　1 0.250 800 25,15

　　2 0.125 600 35,15

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　　表2 正交試驗數(shù)據(jù)表 Tab 2 Data of orthogonal experiment

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　　因素考察指標

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　　試驗號 氫氧化鈉濃度 超聲功率 超聲時間 斑蝥素含量

　　A B C /mg·g-1 得分

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　　1 1 1 1 0.084 1.7

　　2 2 1 2 0.044 0.9

　　3 1 2 2 0.175 3.6

　　4 2 2 1 0.486 10

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　　I1 5.3 2.6 11.7

　　I2 10.9 13.6 4.5

　　I1 2.7 1.3 5.8

　　I2 5.5 6.8 2.3

　　R 2.8 5.5 2.5

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　　2.3　工藝驗證　按2.2所得好的工藝提取3批次斑蝥，分別測定含量。另取同批次斑蝥2g,在10倍量 125mmol·L-1氫氧化鈉溶液中浸泡30min，加熱至 100℃提取60min,濾過，殘渣再用同法提取60min,濾過，合并濾液，以3000r·min-1離心10min，上清液水浴濃縮至20mL,共做3份，照含量測定方法測定含量。比較兩種方法所得斑蝥素得率煎煮法為1.14, 1.04,1.08，平均為1.09;超聲法為1.16，1.04，1.10平均為1.10，P>0.05。

　　3 結果

　　由表2R值可知RB>RA≈RC，影響因素大小順序為B>A≈C，功率是影響斑蝥素含量的重要因素。因IA2>IA1，IB2>IB1>， IC1>IC2，確定好的工藝為A2B2C1，即用125mmol·L-1氫氧化鈉，功率 600kHz超聲提取2次(25，15min)。該40min超聲提取工藝與120min煎煮效果相當。

　　4　討論

　　煎煮法所需時間長，加之斑蝥體內(nèi)脂肪等有機物在氫氧化鈉作用下，加熱后產(chǎn)生強烈惡臭，煎煮液十分粘稠，濾過困難。用超聲代替煎煮提取斑蝥素克服了上述不足。

　　超聲波輻射可以導致生物體系發(fā)生各種生物效應，其物理機制包括3個方面：熱學機制、力學(機械)機制和空化機制，空化機制包括穩(wěn)態(tài)空化和瞬態(tài)空化兩個方面。一般認為，在藥物提取過程中起主要作用的是空化機制。功率較低時容易穩(wěn)態(tài)空化，液體中氣泡并不破裂，而是進入體共振(脈動)狀態(tài)，在其周圍產(chǎn)生微聲流，微聲流的粘滯應力及氣泡高頻脈動本身產(chǎn)生的剪切力會破壞細胞。進一步提高聲強時，則發(fā)生瞬態(tài)空化，氣泡在負壓相迅速膨脹，隨即又在正壓相急速收縮以至崩潰，其瞬時溫度可達數(shù)千度，并常伴有發(fā)光，沖擊波及高速射流等現(xiàn)象，藥材細胞會被破壞。因此，理論上，功率的提高及超聲時間的延長對藥材細胞破壞有利(從而有效成分溶出更充分)，但雜質(zhì)的溶出亦大大增加，不利于后續(xù)處理，甚至有可能誘發(fā)化學反應，降低有效成分的得率，本實驗所得好的工藝中，亦印證了這一點。 (中國醫(yī)院藥學雜志第25卷第3期)

　　產(chǎn)品型號：JP600G型超聲波提取/乳化機組

　　機型結構：超聲波發(fā)生器與提取罐分體式

　　超聲頻率：28KHz

　　超聲峰值功率：1000W (由原600W升級至1000W，價格不變)

　　提取罐內(nèi)尺寸：直徑320 ×高250mm

　　提取罐容積：小于等于20L

　　攪拌電機功率：15W

　　攪拌電機轉(zhuǎn)速：10-30轉(zhuǎn)/min(可調(diào))

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源：220VAC 50HZ

　　具有數(shù)顯時鐘可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯功率可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯掃頻可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯溫度可調(diào)功能

　　武漢嘉鵬電子有限公司專業(yè)致力于超聲波提取/萃取、超聲波乳化、超聲波清洗、超聲波污水處理、超聲波酒類醇化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)及銷售。公司擁有多項技術。其中“數(shù)字式大功率多用途超聲波電源系統(tǒng)”獲武漢市重大科技成果獎。數(shù)字掃頻實現(xiàn)了用戶迫切需要的變頻要求的同時還彌補了早期雙頻或多頻技術帶來的超聲轉(zhuǎn)換效率很低的弊端。此項技術經(jīng)由全國各大院校的用戶使用后反應很好。應用于植物提取、乳化、污水處理等領域，院校包括：清華大學、北京大學、浙江大學、華中科技大學、武漢大學、華中師大、中國地質(zhì)大學、武漢科技大學、上海交大、浙江工業(yè)大學、蘭州大學、河南農(nóng)業(yè)大學、武漢化工學院、吉林大學、四川大學、華南理工大學、華東理工大學、江漢大學、長江大學、中科院武漢植物所、昆明植物所、中科院過程所、中科院武漢物理所、武漢市藥檢所等。公司產(chǎn)品行銷全國除港、澳、臺外的所有省份及直轄市。售后方面：公司產(chǎn)品使用自主技術故性能穩(wěn)定、質(zhì)量很好。公司承諾5年內(nèi)免費質(zhì)保。用戶采用超聲波需注意的事項：超聲波提取方面：一、被提取物需粉碎到20目或更細。粉碎越細得率越高。二、選用合適的提取溶劑。三、根據(jù)產(chǎn)品的特性和產(chǎn)量合理的安排提取工藝。

　　超聲波乳化方面：一、乳化液的配方包括乳化劑的用量。二、乳化時間的選定，并不是時間長就越好，乳化過程是分散和聚合不停的循環(huán)的過程。按現(xiàn)有試驗結果顯示10-15分鐘的乳化粒徑可達100納米。

　　重要的是數(shù)字掃頻的選擇，此項共有16檔選擇，數(shù)值越低則氣泡越粗、力量越大;數(shù)值越高則氣泡越細、力量越小。不同的提取或乳化物質(zhì)改變數(shù)字掃頻會帶來不同的效果及效率。

　　超聲波提取天然產(chǎn)物包括超聲波提取多肽、氨基酸、核酸、各種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木質(zhì)素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮發(fā)油、黃酮、糖苷類、苯丙素類、有機酸、酚類、醌類、甾體化合物、抗生素類等。